PadginTeb , Department of Education

بخش آموزش پادگین طب

Homeمقالات آموزشیسنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش MTT

سنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش MTT

سنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش  MTT 

 

بررسی تکثیر و بقای سلولی از تکنیک­های مهم و اساسی در آزمایشگاه­های سلولی محسوب می­شود. این بررسی نیازمند کمّی سازی دقیق تعداد سلول­های زنده در محیط کشت سلولی است. بنابراین روش­های محاسبۀ بقای سلولی جهت بهینه­ سازی شرایط کشت سلول، ارزیابی عوامل رشد سلولی، کشف آنتی­ بیوتیک­ها و داروهای ضد سرطان، ارزیابی اثرات سمّی آلاینده ­های محیطی و مطالعات آپوپتوز ضروری هستند.

 

برای چنین اهدافی روش­های متعددی می­توانند مورد استفاده قرار گیرند اما روش­های غیرمستقیم با استفاده از نشانگرهای فلورسنت یا رنگ­زا (کروموژن)، روش­هایی بسیار سریع در مقیاس بزرگ را فراهم می ­کنند. از میان این روش­ها، سنجش بقای سلولی به روش MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) پرکاربردترین روش محسوب می­ شود. این روش، یک روش رنگ سنجی برای بررسی تکثیر و بقای سلول­ها است که در سال 1983 توسط Mossman معرفی گردید.

 

   اساس این روش مبتنی بر فعالیت میتوکندری می­ باشد. فعالیت میتوکندریایی در سلول­های زنده به صورت پایدار است و بنابراین افزایش یا کاهش تعداد سلول­های زنده به صورت خطی با فعالیت میتوکندری در ارتباط می­ باشد. رنگ تترازولیموم MTT در سلول­های فعال (به لحاظ متابولیکی)، إحیا می­ شود. دهیدروژنازهای میتوکندریایی در سلول­های زنده، حلقۀ تترازولیوم را شکسته و با تولید NADH و NADPH منجربه تشکیل رسوب نامحلول ارغوانی رنگ به نام فورمازان می­شوند. این رسوب می­تواند توسط ایزوپروپانول یا دی متیل سولفواکسید حل شود. از سوی دیگر، سلول­های مرده، چنین توانایی را نداشته و بنابراین سیگنالی را نشان نمی­ دهند. در این روش، تشکیل رنگ به عنوان نشانگر سلول­های زنده مورد استفاده قرار می ­گیرد. شدت رنگ تولید شده، در طول موج 540 تا 630 نانومتر اندازه­ گیری می­ شود و به طور مستقیم با تعداد سلول­های زنده متناسب است.

 

کاربردهای مهم این روش عبارتند از :

 

اندازه ­گیری تکثیر سلولی در پاسخ به عوامل رشد، سایتوکاین­ها، میتوژن­ها و مواد مغذی

تجزیه و تحلیل ترکیبات کشندۀ سلول یا متوقف کنندۀ رشد سلول مانند داروهای ضد سرطان، سموم، آلاینده­های محیط زیست و سایر عوامل دارویی

ارزیابی واسطه­های فیزیولوژیک و آنتی­بادی­های مهار کنندۀ رشد سلولی

کشف دارو، غربالگری داروهای سمی و ضد سرطان

مطالعۀ فعالیت سلول

بررسی اتصالات سلولی

مطالعات سمیّت شیمیایی

 

   ایمنی بالا و فراهم نمودن یک سیستم رنگ سنجی و غیر رادیواکتیو از مزایای مهم این روش محسوب می­ شوند. استفاده از این کیت بسیار راحت است، حساسیت و دقت بالایی دارد و کمتر از 950 سلول را می­تواند شناسایی کند. از سوی دیگر بازدهی بالایی برای اندازه­گیری تکثیر، بقاء و مرگ و میر سلولی دارد و روش اجرای آن نیازی به مراحل وقت گیر شستشو و انتقال از یک پلیت به پلیت دیگر را ندارد. نمونه­های مورد بررسی در این روش عبارتند از سلول­های چسبنده یا معلق و سلول­های تکثیر شونده یا غیر تکثیر شونده.

 

   کیت سنجش MTT محصول کمپانی زلبیو آلمان، روشی ساده، ارزان، حساس و تکرارپذیر را برای بررسی میزان بقای سلول­ها در محیط کشت سلولی و مطالعات دارویی فراهم می کند. این کیت، سنجش بقای سلول­ها را به روش رنگ سنجی و در طول موج 570 نانومتر و طول موج مرجع 630 نانومتر انجام می ­دهد. در نهایت، با استفاده از مقادیر جذب نوری، محقق قادر به ارائۀ منحنی درصد بقای سلول­ها در مقابل غلظت ترکیب مورد مطالعه خواهد بود. این کیت برای انجام 1000 تست طراحی شده است و کیفیت آن با نمونه ­های مشابه آمریکایی برابری کرده و به لحاظ قیمت بسیار کم هزینه­تر از نمونه­ های مشابه می­ باشد.

 

 

بخش علمی شرکت پادگین طب

(مرکز تحقیقات، مشاوره، واردات و تهیه کیت های تخصصی

 و فوق تخصصی پژوهش های پایه و بالینی)

این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید

www.padginteb.com

22872816- 22872815

منابع

www.bio-rad.com 

www.sigmaaldrich.com 

4537 بازدید آخرین ویرایش در دوشنبه, 09 مرداد 1396 ساعت 10:27

About the author

شرکت تامین مواد مورد نیاز در آزمایشات تشخیصی

تازه های آموزش

آمار بازدیدکنندگان

Today22
Yesterday336
This week358
This month5499
Total237414

  • IP: 54.156.37.174

Who Is Online

2
Online

سه شنبه, 04 ارديبهشت 1397 02:25

موقعیت مکانی

با ما در تماس باشید

تهران,خیابان شریعتی,خیابان خواجه عبدالله انصاری,خیابان ابوذر شمالی,پلاک 60,طبقه چهارم واحد 16