PadginTeb , Department of Education

بخش آموزش پادگین طب

Homeمقالات آموزشیسنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش MTT

سنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش MTT

سنجشِ تکثیر و بقای سلولی به روش MTT 

بررسی تکثیر و بقای سلولی از تکنیک­های مهم و اساسی در آزمایشگاه­های سلولی محسوب می­شود. این بررسی نیازمند کمّی سازی دقیق تعداد سلول­های زنده در محیط کشت سلولی است. بنابراین روش­های محاسبۀ بقای سلولی جهت بهینه­ سازی شرایط کشت سلول، ارزیابی عوامل رشد سلولی، کشف آنتی­ بیوتیک­ها و داروهای ضد سرطان، ارزیابی اثرات سمّی آلاینده ­های محیطی و مطالعات آپوپتوز ضروری هستند.


برای چنین اهدافی روش­های متعددی می­توانند مورد استفاده قرار گیرند اما روش­های غیرمستقیم با استفاده از نشانگرهای فلورسنت یا رنگ­زا (کروموژن)، روش­هایی بسیار سریع در مقیاس بزرگ را فراهم می ­کنند. از میان این روش­ها، سنجش بقای سلولی به روش MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) پرکاربردترین روش محسوب می­ شود. این روش، یک روش رنگ سنجی برای بررسی تکثیر و بقای سلول­ها است که در سال 1983 توسط Mossman معرفی گردید.

اساس این روش مبتنی بر فعالیت میتوکندری می­ باشد. فعالیت میتوکندریایی در سلول­های زنده به صورت پایدار است و بنابراین افزایش یا کاهش تعداد سلول­های زنده به صورت خطی با فعالیت میتوکندری در ارتباط می­ باشد. رنگ تترازولیموم MTT در سلول­های فعال (به لحاظ متابولیکی)، إحیا می­ شود. دهیدروژنازهای میتوکندریایی در سلول­های زنده، حلقۀ تترازولیوم را شکسته و با تولید NADH و NADPH منجربه تشکیل رسوب نامحلول ارغوانی رنگ به نام فورمازان می­شوند. این رسوب می­تواند توسط ایزوپروپانول یا دی متیل سولفواکسید حل شود. از سوی دیگر، سلول­های مرده، چنین توانایی را نداشته و بنابراین سیگنالی را نشان نمی­ دهند. در این روش، تشکیل رنگ به عنوان نشانگر سلول­های زنده مورد استفاده قرار می ­گیرد. شدت رنگ تولید شده، در طول موج 540 تا 630 نانومتر اندازه­ گیری می­ شود و به طور مستقیم با تعداد سلول­های زنده متناسب است.

کاربردهای مهم این روش عبارتند از :

  • اندازه ­گیری تکثیر سلولی در پاسخ به عوامل رشد، سایتوکاین­ها، میتوژن­ها و مواد مغذی
  •      تجزیه و تحلیل ترکیبات کشندۀ سلول یا متوقف کنندۀ رشد سلول مانند داروهای ضد سرطان، سموم، آلاینده­های محیط زیست و سایر عوامل دارویی
  • ارزیابی واسطه­ های فیزیولوژیک و آنتی­بادی­های مهار کنندۀ رشد سلولی
  •      کشف دارو، غربالگری داروهای سمی و ضد سرطان
  •      مطالعۀ فعالیت سلول
  •      بررسی اتصالات سلولی
  •      مطالعات سمیّت شیمیایی

ایمنی بالا و فراهم نمودن یک سیستم رنگ سنجی و غیر رادیواکتیو از مزایای مهم این روش محسوب می­ شوند. استفاده از این کیت بسیار راحت است، حساسیت و دقت بالایی دارد و کمتر از 950 سلول را می­تواند شناسایی کند. از سوی دیگر بازدهی بالایی برای اندازه­گیری تکثیر، بقاء و مرگ و میر سلولی دارد و روش اجرای آن نیازی به مراحل وقت گیر شستشو و انتقال از یک پلیت به پلیت دیگر را ندارد. نمونه­های مورد بررسی در این روش عبارتند از سلول­های چسبنده یا معلق و سلول­های تکثیر شونده یا غیر تکثیر شونده.

کیت سنجش MTT محصول کمپانی زلبیو آلمان، روشی ساده، ارزان، حساس و تکرارپذیر را برای بررسی میزان بقای سلول­ها در محیط کشت سلولی و مطالعات دارویی فراهم می کند. این کیت، سنجش بقای سلول­ها را به روش رنگ سنجی و در طول موج 570 نانومتر و طول موج مرجع 630 نانومتر انجام می ­دهد. در نهایت، با استفاده از مقادیر جذب نوری، محقق قادر به ارائۀ منحنی درصد بقای سلول­ها در مقابل غلظت ترکیب مورد مطالعه خواهد بود. این کیت برای انجام 1000 تست طراحی شده است و کیفیت آن با نمونه ­های مشابه آمریکایی برابری کرده و به لحاظ قیمت بسیار کم هزینه­تر از نمونه­ های مشابه می­ باشد.

بخش علمی شرکت پادگین طب

(مرکز تحقیقات، مشاوره، واردات و تهیه کیت های تخصصی و فوق تخصصی پژوهش های پایه و بالینی)

این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید       این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید

22872816- 22872815

منابع

www.bio-rad.com 

www.sigmaaldrich.com 

6570 بازدید آخرین ویرایش در یکشنبه, 20 خرداد 1397 ساعت 19:44

About the author

شرکت تامین مواد مورد نیاز در آزمایشات تشخیصی

تازه های آموزش

آمار بازدیدکنندگان

Today146
Yesterday229
This week1597
This month5714
Total261563

  • IP: 54.162.128.159

Who Is Online

7
Online

یکشنبه, 31 تیر 1397 12:33

موقعیت مکانی

با ما در تماس باشید

تهران,خیابان شریعتی,خیابان خواجه عبدالله انصاری,خیابان ابوذر شمالی,پلاک 60,طبقه چهارم واحد 16