برای چنین اهدافی روشهای متعددی میتوانند مورد استفاده قرار گیرند اما روشهای غیرمستقیم با استفاده از نشانگرهای فلورسنت یا رنگزا (کروموژن)، روشهایی بسیار سریع در مقیاس بزرگ را فراهم می کنند. از میان این روشها، سنجش بقای سلولی به روش MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) پرکاربردترین روش محسوب می شود. این روش، یک روش رنگ سنجی برای بررسی تکثیر و بقای سلولها است که در سال 1983 توسط Mossman معرفی گردید.
اساس این روش مبتنی بر فعالیت میتوکندری می باشد. فعالیت میتوکندریایی در سلولهای زنده به صورت پایدار است و بنابراین افزایش یا کاهش تعداد سلولهای زنده به صورت خطی با فعالیت میتوکندری در ارتباط می باشد. رنگ تترازولیموم MTT در سلولهای فعال (به لحاظ متابولیکی)، إحیا می شود. دهیدروژنازهای میتوکندریایی در سلولهای زنده، حلقۀ تترازولیوم را شکسته و با تولید NADH و NADPH منجربه تشکیل رسوب نامحلول ارغوانی رنگ به نام فورمازان میشوند. این رسوب میتواند توسط ایزوپروپانول یا دی متیل سولفواکسید حل شود. از سوی دیگر، سلولهای مرده، چنین توانایی را نداشته و بنابراین سیگنالی را نشان نمی دهند. در این روش، تشکیل رنگ به عنوان نشانگر سلولهای زنده مورد استفاده قرار می گیرد. شدت رنگ تولید شده، در طول موج 540 تا 630 نانومتر اندازه گیری می شود و به طور مستقیم با تعداد سلولهای زنده متناسب است.
کاربردهای مهم این روش عبارتند از :
- اندازه گیری تکثیر سلولی در پاسخ به عوامل رشد، سایتوکاینها، میتوژنها و مواد مغذی
- تجزیه و تحلیل ترکیبات کشندۀ سلول یا متوقف کنندۀ رشد سلول مانند داروهای ضد سرطان، سموم، آلایندههای محیط زیست و سایر عوامل دارویی
- ارزیابی واسطه های فیزیولوژیک و آنتیبادیهای مهار کنندۀ رشد سلولی
- کشف دارو، غربالگری داروهای سمی و ضد سرطان
- مطالعۀ فعالیت سلول
- بررسی اتصالات سلولی
- مطالعات سمیّت شیمیایی
ایمنی بالا و فراهم نمودن یک سیستم رنگ سنجی و غیر رادیواکتیو از مزایای مهم این روش محسوب می شوند. استفاده از این کیت بسیار راحت است، حساسیت و دقت بالایی دارد و کمتر از 950 سلول را میتواند شناسایی کند. از سوی دیگر بازدهی بالایی برای اندازهگیری تکثیر، بقاء و مرگ و میر سلولی دارد و روش اجرای آن نیازی به مراحل وقت گیر شستشو و انتقال از یک پلیت به پلیت دیگر را ندارد. نمونههای مورد بررسی در این روش عبارتند از سلولهای چسبنده یا معلق و سلولهای تکثیر شونده یا غیر تکثیر شونده.
کیت سنجش MTT محصول کمپانی زلبیو آلمان، روشی ساده، ارزان، حساس و تکرارپذیر را برای بررسی میزان بقای سلولها در محیط کشت سلولی و مطالعات دارویی فراهم می کند. این کیت، سنجش بقای سلولها را به روش رنگ سنجی و در طول موج 570 نانومتر و طول موج مرجع 630 نانومتر انجام می دهد. در نهایت، با استفاده از مقادیر جذب نوری، محقق قادر به ارائۀ منحنی درصد بقای سلولها در مقابل غلظت ترکیب مورد مطالعه خواهد بود. این کیت برای انجام 1000 تست طراحی شده است و کیفیت آن با نمونه های مشابه آمریکایی برابری کرده و به لحاظ قیمت بسیار کم هزینهتر از نمونه های مشابه می باشد.
بخش علمی شرکت پادگین طب
(مرکز تحقیقات، مشاوره، واردات و تهیه کیت های تخصصی و فوق تخصصی پژوهش های پایه و بالینی)
این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید این آدرس ایمیل توسط spambots حفاظت می شود. برای دیدن شما نیاز به جاوا اسکریپت دارید
22872816- 22872815
منابع
